И

Иммуногистохимия

Иммуногистохимия или ИГХ — это аналитический метод определения протеинов (антигенов) в клетках биологических тканей на основе реакции антиген-антитело. Не следует путать ИГХ с иммуноцитохимии, где тот же принцип применяется дли определения эпитопов в отдельных клетках. Учредителями иммуногистохимического метода является группа исследователей под руководством Альберта Кунса (Albert Coons), которые в 1941 г.. Впервые получили меченые флюоресцеина антитела и использовали их на практике. Разработка Кохлером и Милстейном (1975) гибридомной технологии стала кардинальным событием в иммуногистохимии, которая позволила получать высокоспецифичны антитела в больших объемах, и дала возможность использовать иммуногистохимию в рутинной клинической практике.

Образцы для ИГХ

ИГХ может проводиться на свежезамороженной образцах или, чаще всего, на фиксированных в формалине и залитых в парафиновые блоки тканинi. Тонкий слой (4-5 мкм) залитой керосином ткани нарезается микротомов и фиксируется на стекле для проведения дальнейших этапов ИГХ.

Методы ИГХ

ИГХ может проводиться прямым или косвенным методами. При прямом методе используют только первичные антитела, меченые хромогенного или флуоресцентными репортерами для их визуализации. Используется редко, поскольку в этом случае полученный сигнал может быть достаточно слабым. Косвенный метод позволяет усилить сигнал от комплексов антиген-антитело с помощью использования дополнительных реагентов, в частности вторичных антител.

Первичные антитела

Для определения эпитопов в исследуемой ткани с помощью ИГХ, применяются моноклональные или поликлональные антитела, обладающие способностью связываться исключительно с исследуемым протеином, если он есть в ткани. Более специфичными являются моноклональные антитела.

Вторичные антитела

Специфически связываются с комплексом первичным антителом, связанным с антигеном в исследуемой ткани. Вторичные антитела имеют в своей структуре ферменты (пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза), благодаря которым комплекс антиген-антитело-вторичное антитело может быть визуализированный при реакции с хромогенным субстратом (диаминобензидин, BCIP т.д.).

Сферы применения ИГХ

ИГХ имеет применение как в научно-исследовательской так и в рутинной клинической практике.

Научные исследования

Данный метод широко застосовуетья в базовой научно-исследовательской работе для определения протеинов или подтверждения результатов других методов исследования белков, или более точных методов — масс-спектрометрия, ПЦР в реальном времени.

Клиника

ИГХ часто является решающим в диагностике опухолей. Так, по различным данным, после проведения иммуногистохимического исследования первичный гистологический диагноз был изменен в 20% — 40% случаев. Кроме того, ИГХ активно применяется для определения экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов при раке молочной железы, на основе чего определяется дальнейшая тактика лечения. С помощью ИГХ определяют маркеры пролиферации при раке щитовидной железы. Таким образом, ИГХ используют в рутинной клинической работе для установления диагноза и предсказания эффекта от терапии. Например, все мелкоклеточные лимфомы (опухоли с лимфоцитов) похожи в рутинно-окрашенных препаратах, они состоят из клеток, что крайне трудно отличить даже от нормальных лимфоцитов. Но все лимфоциты делятся на большое количество групп по их функцией. Они различаются составом рецепторов на мембране. Эти рецепторы являются белковыми молекулами, в которых разработаны антитела, и используют для иммуногистохимического окрашивания. С каждого типа лимфоцитов может возникать опухоль — лимфома. Все они лечатся химиотерапией. Состав препаратов, входящих в схемы лечения, различен в зависимости от типа лимфоцитов, из которых возникла опухоль. Таким образом, схема химиотерапии подходит под конкретный тип лимфомы. Если выбрать неправильную схему терапии, то она будет или неэффективной, или даже губительной. На сегодня существует более 50 видов лимфом и несколько меньше режимов химиотерапии. Поэтому эффективное лечение лимфом полностью зависит от правильности постановки диагноза, которое невозможно без иммуногистохимического исследования. Используют этот метод и в диагностике некоторых неопухолевых заболеваний. По его результатам врачи выбирают наиболее эффективный тип лечения, эффективный у данного конкретного больного.

Изображения по теме

  • Иммуногистохимия
Показать больше

Похожие статьи

Добавить комментарий

Проверьте также
Закрыть
Кнопка «Наверх»
Закрыть
Закрыть