И

Изоэлектрическая фокусировки

Изоэлектрическая фокусировки или електрофокусування — метод разделения молекул по значению изоэлектрической точки (pI). Изоэлектрическая фокусировки является типом зонной электрофореза и обычно выполнялся в геле, и основанное на факте, что заряд молекул меняется с кислотностью (pH) среды.

Молекулы, предназначенные для изоэлектрической фокусировки, добавляются к среде, что градиент значений pH (обычно создан ациклическими цвиттер-ионами). В этой среде создается электрическое поле, которое заставляет заряженные частицы двигаться в намрямку электрического поля. Поскольку частица движется в геле с переменным pH, ее заряд меняется, пока она не достигнет точки, в которой будет достигнута ее изоэлектрическая точка. В этот момент молекула больше не имеет электрического заряда (благодаря протонирования и депротонирования связанных функциональных групп) и таким образом останавливается на месте.

Метод часто применяется при исследовании белков, которые разделяются, таким образом, основываясь на относительном содержании кислых и основных аминокислотных остатков, которые влияют на значение pI. В этом случае используется полиакриламидный, Крохмалёва или агарозном гель. В этом процессе обычно используются гели с большими порами для устранения артефактов, вызванных разной скоростью миграции белков в геле. Изоэлектрическая фокусировки позволяет разделение белков с разницей значение pI только на 0,01. Часто это первый шаг очистки белков, после чего используются другие методы, такие как SDS-PAGE, разделяющей белки по их молекулярной массой.

Показать больше

Похожие статьи

Добавить комментарий

Проверьте также
Закрыть
Кнопка «Наверх»
Закрыть
Закрыть